Способы определения группы крови

Методы определения группы крови

Каждому человеку полезно запомнить свою группу крови. Это может неожиданно пригодиться при чрезвычайных ситуациях. Не зря у военнослужащих отмечается группа крови на гимнастерке или жетонах. Проблемы с тем, как определить группу крови, не существует. В крупных лечебных учреждениях этим занимаются лаборатории. Но даже в небольших сельских амбулаториях имеются стандартные наборы для определения группы, а провести анализ умеют все врачи и средние медицинские работники. Самостоятельно делать это ни к чему, когда есть специалисты.

Какая группа крови у ребенка можно предположить по родителям. Например, зная, что у родителей вторая, третья или четвертая, не стоит надеяться, что у ребенка будет первая.

Советы для домашнего определения

Подобные советы дают люди, которые «живут» в интернете и собирают любую информацию без разбора. Порой переиначивают ее на свой лад.

Действительно, имеется теория питания в зависимости от типа крови и проведены попытки связать с ней характер личности. Но это разрабатывалось для подбора наиболее подходящего рациона, предотвращения болезней. О связи типа личности с номером крови даже психологи перестали говорить.

Тем более, нельзя судить по любимым блюдам или наклонности к лидерству о своей группе.

В домашних условиях что-либо узнать лучше из полноценных статей, консультаций специалистов. Возможно, имеются медицинские документы (амбулаторная карта, выписки из стационара), в которых есть сведения о вашей крови.

По желанию доноров и пациентов стационаров в паспорт можно проставить печать с указанием этих сведений.

Кто придумал группы крови

Первооткрывателем четырех групп крови является австрийский ученый и врач К. Ландштейнер, получивший за это Нобелевскую премию по медицине в 1930 году. Открытие позволило предотвратить смертельные исходы по причине переливания, изучать предварительно совместимость донорских признаков и реципиента.

Суть предложенной системы АВ0 заключается в наличии у человека и животных антигенных структур на эритроцитах. Типовых антител (гаммаглобулинов) к ним в плазме не имеется. Поэтому реакцию «антиген + антитело» можно использовать для определения.

Склеивание эритроцитов происходит во время встречи антигена со своим антителом. Такая реакция называется гемагглютинацией. Она видна при проведении анализа в виде мелких хлопьев. Определение группы крови основывается на получении картины агглютинации с типовыми сыворотками.

Антигены эритроцитов типа «А» связываются с антителами «ά», соответственно «В» с «β». По составу крови выделены:

• I, или 0 (ά, β) — на поверхности эритроцитов совсем нет антигенов;
• II, или А (β) — содержат антиген А с антителом β;
• III, или В (ά) — имеется антиген типа В с антителом ά;
• IV, или АВ(00) — имеет оба антигена, но не содержит антител.

Антигены имеются у зародыша человека уже в эмбриональном периоде, а антитела (агглютинины) появляются в сыворотке новорожденных в течение первого месяца жизни.

Стандартное определение группы крови (простой метод)

Для проведения анализа на группу крови нужны эритроциты пациента (берутся из капли крови) и стандартные сыворотки, содержащие известные антигены.

На плоской тарелке двумя рядами помещают по крупной капле четырех сывороток (достаточно только III и II, но для контроля берется еще 1 и 1V). Разными стеклянными палочками (удобно пользоваться глазными пипетками) в капли сывороток вносят исследуемую кровь (соотношение должно получиться примерно 1:10) и осторожно помешивают.

Пять минут тарелку покачивают, давая возможность сывороткам хорошо перемешаться с кровью.

Расшифровка результатов

Проходит 5 минут, и можно оценивать результаты анализа. В больших каплях сыворотки наступает просветление, в одних образуются мелкие хлопья (реакция агглютинации), в других их нет. Здесь возможны варианты:

• если агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками III и II групп (+ контрольные 1 и 1V) — это первая группа;
• если свертывание отмечается во всех, кроме II — это указывает на вторую группу;
• при отсутствии агглютинации только с III сывороткой — устанавливается третья группа крови;
• если свертываемость отмечается во всех пробах, включая 1V-контрольную — группа четвертая.

Когда сыворотки расположены в правильном порядке, на тарелке проставлены подписи, то ориентироваться легко: где нет агглютинации, такая и группа.

Бывают случаи, когда склеивание видно неясно. Тогда анализ переделывают, мелкую агглютинацию смотрят под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Для уточнения группы при невыраженной агглютинации применяют метод двойной перекрестной реакции со стандартными эритроцитами. В данном случае известными являются не сыворотки, как в простом методе, а эритроциты. У пациента кровь набирают в пробирку, центрифугируют и для исследования пипеткой откачивают сверху сыворотку.

На плоскую белую тарелку капают 2 большие капли сыворотки от пациента. В них добавляются стандартные эритроциты А (II) и В (III) групп крови. Постепенно размешивают, покачивают тарелку.

Результат оценивается через 5 минут:

• если агглютинация наступила в обеих каплях, группа первая;
• если нет ни в одной пробе, группа четвертая;
• если в одной из примененных известных эритроцитов, то группа определяется по наличию или отсутствию свертываемости в капле.

Определение группы цоликлонами

Цоликлоны — это синтетические заменители сывороток. Они содержат искусственные заменители агглютининов ά и β. Их называют эритротестами «Цоликлон анти-А» (розового цвета) и «анти-В» (синего). Ожидаемая агглютинация происходит между эритроцитами исследуемой крови и агглютининами цоликлонов.

Методика не требует использования двух серий, считается более точной и надежной. Проведение и оценка результатов такие же, как в простом стандартном методе.

Вид цоликлонов	Группа крови
Результат агглютинации	Анти-А	Анти-В
—	—	0(I)
+	—	A(II)
—	+	B(III)
+	+	AB(IV)

Особенность: четвертая группа АВ(IV) обязательно подтверждается реакцией агглютинации со специфическим цоликлоном «анти-АВ» и отсутствием неспецифического склеивания эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Метод позволяет определить группу и резус фактор в лаборатории и полевых условиях. В состав набора входит карточка с лунками. На дно лунок уже нанесены высушенные реагенты. Здесь, кроме «анти-А», «анти-В» и «анти-АВ» используется «анти-D», который дает результат резус-фактора.

Можно использовать кровь в любом виде, подойдет соединение с консервантом и взятая из пальца.

Перед исследованием на карточке записывается фамилия пациента, в каждую лунку вносится капля воды для растворения ингредиентов. Затем отдельными палочками в лунки с реактивами добавляют кровь и слегка перемешивают. Окончательный результат «читают» спустя три минуты.

Группа крови всегда перепроверяется при необходимости переливания. Одновременно контролируют групповую и индивидуальную совместимость. Ведь, на самом деле, в крови человека обнаружено гораздо больше антигенных свойств, чем в системе АВ0. Просто они у большинства населения слабо проявляются.

Но у пациента с тяжелыми заболеваниями, изменяющими свойства крови и аллергизирующими организм, они становятся определяющими, требуют считаться с наличием и уровнем в крови. Поэтому знание пациентом собственной группы добавляет уверенности в результате исследования.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО

ПЛАЗМЕННЫЕ АНТИГЕНЫ

Плазменные (сывороточные) антигены представляют собой определенные комплексы аминокислот или углеводов на поверх­ности молекул белков плазмы (сыворотки) крови.

ПОНЯТИЕ О ГРУППЕ КРОВИ

ГРУППА КРОВИ — это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, кото­рое наследственно детерминировано и является биоло­гическим свойством каждого индивидуума.

Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 меся­це внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько де­сятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний — групп крови — реально может быть несколько миллиардов. Практически они оди­наковы лишь у однояйцевых близнецов, имеющих один и тот же генотип.

В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке крови.

Для каждого известного антигена обнаружены одно­именные антитела (анти-А, анти-В, анти-резус, анти-Келл и т. д.). Груп­повые антитела крови — не такое постоянное свойство организма челове­ка, как антигены. Лишь в групповой системе АВО антитела являются нормальным врожденным свойством плазмы крови. Эти антитела (агглю­тинины а и b) постоянно присутствуют в плазме крови человека.

1. ГРУППЫ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО

Под термином «совместимость» понимают сочетание крови донора и реципиента по антигенам и антителам, не вызывающее иммунологи-ческих взаимодействий.

В зависимости от наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов а и b, все люди разделены на четыре группы:

• Группа О (I) — в эритроцитах агглютиногенов нет, в сыворотке агглютинины а и b.

• Группа А (II) — в эритроцитах агглютиноген А, в сыворотке агг­лютинин b.

• Группа В (III) — в эритроцитах агглютиноген В, в сыворотке агг­лютинин а.

• Группа АВ (IV) — в эритроцитах агглютиногены А и В, агглюти­нинов в сыворотке нет.

Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А(П) и А₂ (II), а группа АВ (IV) — АВ (IV) и А₂В (IV).

Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты. Однако существенного кли­нического значения это не имеет.

Групповая принадлежность крови по системе АВО оп­ределяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время ис­пользуют три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандар­тным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и аити-В).

При плановом исследовании врач стационара определяет группу кро­ви по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборато­рия подтвердила данные, полученные врачом стационара. Если резуль­таты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно повторить.

В экстренном поряд­ке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач ста­ционара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка произво­дится, но постфактум).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ

Наиболее распространен в клиничес­кой и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сы­вороток. Проводят в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25°С.

а) Необходимое оснащение

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различ­ных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) — бесцвет­ная (серая), А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — ярко-желтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлеж­ность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

• Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые дру­гие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(П), В(Ш), AB(IV).

• Изотонический раствор хлорида натрия.

• Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

б) Техника проведения реакции

1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютииирующие сыворот­ки I, II, Ш групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель.

2. Шесть ка­пель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят су­хой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови дол­жно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки), потом их осторожно с по­мощью стеклянных палочек с закругленными краями перемеши­вают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд.

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают ре­зультат реакции.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической ре­акции агглютинации (холодовая агглютинация, пангглютинация, аллергия) необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), A(II) и B(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ₀ (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого под­типа антигена А, реакция агглютинации с гемагглютинирующими сы­воротками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте). Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение допол­нительной реакции с так называемым анти-А, реактивом.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ (ПЕРЕКРЕСТНЫЙ СПОСОБ)

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в иссле­дуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изо-гемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител а и b с по­мощью стандартных эритроцитов.

• Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отлича­ется тем, что для реакции агглютинации необходимы стандарт­ные эритроциты трех групп крови: 0(1), А(II), В(III).

• Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с за­ранее известной группой крови, хранят при 4-8°С.

На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по од­ной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними — по одной маленькой капле (0,01мл) стан­дартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эрит­роцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольны­ми (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специ­фическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Для определения группы крови используются моноклональные анти­тела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

Гибридома — это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, син­тезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома при­обретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезиро­вать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Разработаны стандартные реагенты — моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определе­ния агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цве­та, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной боль­шой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакци­ей агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими ре­зус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц этого фактора не содержат. Так он назван, по имени макаки Резус, у которой он всегда имеется.

Антигены резус относят к липопротеидам. Они являются очень актив­ными и способны вызывать образование иммунных антител.

Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона.

Дата добавления: 2014-01-06 ; Просмотров: 6561 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Как определить группу крови — популярные методы

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов. Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов. При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций. Ее результат — агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе — путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор. После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256. Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования). После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

• если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
• если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном). Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I. Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

• универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
• скарификатор для получения образца для исследования;
• чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
• стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.