Системы классификации групп крови

Таблица групп крови и характеристика по системе АВ0

Каждый человек — носитель генетически наследуемых характеристик, неизменных при естественных условиях, или определенного типа крови. Группа крови — отличительный признак белков, углеводов, гликопротеинов, гликолипидов, формирующихся на поверхности эритроцитов и носящих название «антиген». Составляя часть мембраны красных форменных элементов, антигены обнаруживают себя у всех представителей рода человеческого.

В медицине классифицируют множество разновидностей эритроцитарных групповых антигенов, то есть разные люди могут обладать одинаковым антигенным набором. Исходя из типологии антигенов, различают около трех десятков систем групп крови, таких как АВ0, MNS, Lutheran, Rh, Duffy, Colton и др.

Современная медицина пользуется двумя — АВ0 и Rh, играющими решающую роль при трансфузии. Подробнее рассмотрим в данной статье обозначенные системы группы крови «а-бэ-ноль» и «резус-фактор».

Система группы крови AB0

Открытию группы крови по системе АВ0 мы обязаны австрийскому иммунологу Карлу Ландштейнеру. Именно он сделал вывод, что одинаковая с виду кровь различается эритроцитарными свойствами. Жидкую подвижную соединительную ткань он распределил на три группы, обозначив их как A, B, 0. Позднее чешский врач Я. Янский открыл дополнительную группу AB и предложил обозначать типы крови с помощью цифр I, II, III, IV.

С этих пор трансфузия (переливание) считается эффективным терапевтическим методом, активно используемым при лечении многих болезней.

С 1928 году гигиенической Лигой Наций утверждено еще буквенное обозначение, по сей день принятое за основу классификации во всем мире: 0 (I), A (II), B (III), AB (IV).

Группы крови системы АВ0 позволили определить, почему переливание часто проходит с успехом, однако порой имеет летальный исход. Ландштейнер опытным путем доказал: при смешении эритроцитов одного пациента с плазмой другого, кровь свертывается, образуя хлопья. Эта способность плазмы (сыворотки) склеивать (агглютинировать) красные кровяные клетки получила название изогемагглютинация. Происходит эта реакция из-за присутствия в красных форменных элементах антигенов, именуемых агглютиногенами, которые обозначаются буквами A, B; а в сыворотке — природных антител (агглютининов), обозначаемых как a, b. Изогемагглютинация происходит только тогда, когда встречаются однобуквенные антигены и антитела, например, A-a, B-b.

Соответственно, в человеческой крови невозможно соединение одноименных агглютиногенов и агглютининов, поскольку способность агглютинировать эритроциты приведет к смерти.

Согласно теории Ландштейнера допускаются только четыре сочетания, исключающие встречу однобуквенных антигенов и антител, или 4 разновидности крови. Основанием данного разделения считается способность жидкой подвижной соединительной ткани содержать/не содержать антигены (агглютиногены) А, В и антитела (агглютинины) a (альфа или анти-А), b (бета или анти-Б).

Данная таблица отражает серологию по системе АВ0 группы крови:

Тип	Эритроциты	Плазма (сыворотка)		Характер- ные признаки	% носителей
	агглюти-ногены (глико-липиды)	гемоага-гглютинины и гемолизины (гамма-глобулины)	антиа-гглюти-нины
0 (I)	O	a, b	O	отсутствие антигенов A и B	33,6
A (II)	A	b	A	наличие антигена А	37,8
B (III)	B	a	B	наличие антигена B	20,6
AB (IV)	AB	O	AB	наличие антигенов A и B	8

Как видно из таблицы, в плазме имеются два вида гемолизинов, обозначаемых также буквами a, b. Соединение однобуквенных агглютиногенов и гемолизинов приводит к гемолизу (разрушению) эритроцитов. Данная реакция совершается при температуре 37-40°С, в то время при комнатном температурном режиме встреча одноименных антигенов и антител сопровождается агглютинацией без гемолиза.

Плазма обладателей II, III, IV типов содержит антиагглютиногены, оставившие красные кровяные тельца и ткани, отмечающиеся как агглютиногены – А, В.

Благодаря данной теории стала возможна трансфузия, протекающая без различного рода осложнений.

Существует общепринятое правило определения совместимости крови разных типов: плазма реципиента обязана принять донорские эритроциты. Поэтому у пациента, нуждающегося в переливании, важно учитывать значение агглютининов и гемолизинов, в то время как у отдающего кровь — агглютиногенов, присутствующих в красных форменных элементах.

Решая проблему сочетаемости группы крови по АВ0, необходимо смешать жидкую соединительную ткань с сывороткой, взятой у носителей разных типов крови. Агглютинация наблюдается при следующих сочетаниях:

Групповая принадлежность
Сыворотка	Эритроциты
I	II, III, IV
II	III, IV
III	II, IV

Из этого следует, что по системе AB0 I группе свойственно абсолютное сочетание с остальными, ее носители признаны универсальными донорами. Соответственно, обладатели IV группы являются универсальными реципиентами, так как красные кровяные клетки данного типа не должны вызывать агглютинацию с плазмой носителей другого типа крови.

Поскольку при таком подходе могут возникнуть осложнения, в медицинской среде чаще всего пользуются другим методом: реципиенту переливается одногруппный материал донора при множественной кровопотере. Редко используют выше описанное правило смешивания групп.

Rh-система крови

Значимой системой крови после AB0 считается Rh (резус-фактор), открытая в 40-ые годы 20-го столетия К. Ландштейнером и К. Винером. Она представляет собой 50 антигенов, обнаруживаемых группой крови. Самыми важными признаны 6 (D, C, c, CW, E, e). Наиболее активным является D-антиген, определяющий принадлежность людей к резус-положительному (Rh+)/резус-отрицательному (Rh–) фактору. Наличие антигена говорит о Rh+ у 85% людей белой расы. У остальных 15% антиген (агглютинин) отсутствует, что свидетельствует о Rh–. В сравнении с системой AB0 у Rh отсутствуют необходимые агглютинины в плазме. Но при трансфузии материала Rh+ донора Rh– реципиенту обнаруживаются антитела — антирезус — агглютинины в крови испытуемого, которому переливали донорскую кровь. Повторение процедуры приводит к агглютинации эритроцитов, или гемотрансфузионному шоку.

Ученые пришли к выводу, что носителям Rh– можно переливать только Rh–.

Аналогичная ситуация может возникнуть у матери — обладательницы Rh– при вынашивании ребенка — носителя Rh+, когда резус-агглютиногены, оказываясь в ее организме, активно вырабатывают антитела. Как правило, первая беременность протекает успешно и заканчивается благополучным родоразрешением. По статистике при последующих вынашиваниях Rh+ плода антитела, проникая через плаценту, поражают красные кровяные клетки плода, приводя к выкидышу или гемолитической анемии новорожденных. Поэтому в качестве иммунопрофилактических мер женщинам с Rh– после первых родов вводят концентрат анти-D-антитела.

Тестирование на группу крови и резус-фактор

Знание группы крови, резус-фактора очень важно для спасения жизни в ситуациях, чаще всего связанных с большой кровопотерей или других патологических случаях, когда трансфузия является одним из основных терапевтических методов.

Результаты исследования покажут принадлежность крови человека к одной из групп системы «а-бэ-ноль», исходя из наличия антигенов на красных кровяных тельцах и антител.

Определение принадлежности к группе крови по системе АВ0 происходит по активным стандартным плазмам каждой из групп с титром 1:32 и красным форменным элементам, соответствующим стандарту. Иногда дополнительно используют плазму IV группы. Данные материалы смешивают с кровью пациента, затем следят за реакцией в течение 3 мин. К смеси плазмы с кровью с наступившим склеиванием капают 0,9% раствор хлорида натрия и ждут до 5 минут. Затем считывают агглютинацию через проходящий свет, на основании чего делают вывод о групповой принадлежности:

• отсутствие агглютинации во всех пробах отрицает агглютиноген, говоря об отношении к 0(I);
• агглютинация в плазме с пробами 0(I), В(III) указывает на агглютиноген А и А(II);
• наличие процесса склеивания красных форменных элементов в сыворотке 0(I), А(II) говорит о присутствии агглютиногена В и отношении к В(III);
• протекание агглютинации во всех исследуемых материалах показывает присутствие агглютиногенов А, В и принадлежность к АВ(IV).

В последнем случае возможна неспецифическая реакция. Для подтверждения данных смешивают стандартную сыворотку АВ(IV), кровь испытуемого и ведут наблюдение в течение 5 мин. Если склеивание эритроцитов не происходит, она имеет отношение к группе АВ(IV).

При слабо выраженной агглютинации или в случае сомнения пробу повторяют вновь.

Для тестирования резус-фактора применяют стандартный реагент с антителами к резус-антигенам, смешивая его с кровью испытуемого. После добавления через 3-5 минут физраствора перемешивают содержимое и визуально на проходящий свет определяют наличие склеивания эритроцитов и выпадения осадка. При обнаружении хлопьев красного цвета делают вывод об отношении к Rh+. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh–.

Группа крови по системе АВ0 и Rh принято указывать на одной строке, например, 0 (I)Rh+, 0 (I)Rh- и т.д.

Сдать анализ крови на групповую принадлежность и резус-фактор можно в любой клинической лаборатории. Кроме этих значений в анализе указывают совместимость, определяя материал какой группы, резус-фактора можно переливать при острой необходимости.

Наследование групп крови

Доказано, что группа крови ребенка наследуется от родителей. Существует несколько очевидных закономерностей в наследовании групповой принадлежности:

1. В семье, где один из родителей имеет 0(I), не может родиться малыш с IV(AB) группой. При этом группа второго родителя не имеет значения.
2. Мама и папа — носители 1 группы крови, значит дети родятся с аналогичной группой.
3. У родителей со 2 группой рождаются младенцы только с 1 или 2 группами.
4. Если оба супруга имеют 3 группу, то дети — носители только 1 или 3.
5. При наличии у одного из родителей типа IV(AB) не может родиться ребенок с 1 группой независимо от группы крови другого родителя.
6. При сочетании 2 и 3 групп у супругов дети могут иметь любой из возможных типов крови.

Зафиксировано, что в 1 случае на десять миллионов может произойти наследственная мутация, именуемая бомбейский феномен. Его суть в том, что дети при рождении имеют группу, которая не содержит антигены А и B, а также компонент Н. Такие люди живут обычной жизнью, сложности могут возникнуть лишь при трансфузии или установлении отцовства.

Знать свою группу крови, резус-фактор, а также совместимость с другими группами должен каждый человек. Иногда это становится решающим фактором, от которого зависит жизнь.

Таблицы совместимости групп крови

Способность организма отторгать влитую от другого человека кровь была обнаружена после того, как больные начали гибнуть после переливания крови. Через некоторое время было установлено, что ответственны за это расположенные на эритроцитах антигены и вырабатываемые к ним антитела, после чего были открыты четыре группы крови человека, затем – резус-фактор. Вскоре ученые установили, что групп существует намного больше. Поэтому были разработаны соответствующие классификации и составлены таблицы групп крови, которые позволяют узнать их совместимость друг с другом.

Что такое группа крови?

Группа крови дается человеку от рождения, и на протяжении жизни поменяться уже не может. Определяется она по наличию определенных антигенов, которые находятся на мембранах эритроцитов. Так называют красные кровяные тельца, которые вырабатывает костный мозг. Отвечают они за транспортировку к тканям кислорода, питательных веществ, придают крови красный цвет.

Считается, что на оболочке эритроцита находится более трехсот антигенов. Так называют молекулы, которые способны вызвать иммунный ответ организма. Во время переливания крови отторжение чужеродной ткани происходит из-за того, что иммунитет, обнаружив антигены, которые в организме отсутствуют, распознает их как инородные тела, и начинает синтезировать агглютинины (антитела), чтобы их уничтожить. Но если в плазме оказались антигены, которые в организме уже присутствуют, антитела к ним не вырабатываются.

Хотя группа крови не меняется в течение жизни, иногда врач во время исследования допускает ошибку и не обнаруживает антигены. Обычно это бывает при наличии лейкемии, когда снижается активность одного из ферментов, что определяет группу крови, гликозилтрансфераза. Из-за этого один или оба антигена на оболочках остаются незамеченными (это может быть при лейкозе и некоторых других болезнях). Поэтому может создаться впечатление, что с возрастом группа крови меняется.

Система АВ0

Одной из причин, почему отличается группа крови, является наличие или отсутствие на мембранах определенных антител. Поэтому основная классификация, известная как система АВ0, основана на наличии:

• двух антигенов (А и В), которые расположены на оболочках эритроцитов;
• двух агглютининов: альфа и бета, являющие собой одну из разновидностей антител, что известны как иммуноглобулины, и находятся в плазме.

Антигены А и В состоят из молекул углеводов, что соединяются в цепочки при помощи фермента гликозилтрансфераза. Он отвечает за перенос моносахарида от углевода-донора на молекулу-акцептор, что расположена на эритроците, после чего происходит их соединение.

Согласно системе АВ0 существует четыре сочетания антигенов, которые определяют группу крови человека. Помимо системы АВ0, существуют другие классификации, которые отличаются от данной классификации наличием других антигенов. Второй по значимости системой определения групп крови является резус-фактор, также известно о существовании ещё сорока шести классов антигенов.

В составе первой (I) группы оба антигена отсутствуют, вот почему если они оказываются в организме, иммунитет вырабатывает к ним антитела. Также это означает, что в ней не содержится чужеродных частиц, из-за чего долгое время медики считали, что её можно вливать больным, вне зависимости от группы крови. По этой причине из-за отсутствия антигенов, первая группа крови в таблицах классификации обозначена как цифра «0». Надо заметить, что последние исследования опровергли универсальность первой группы, поэтому её вливают лишь в крайних случаях в ограниченном количестве.

В составе второй (II) группы находится антиген А, поэтому иммунитет вырабатывает антитела к В, если он попадает в плазму. Поэтому кровь группы А переливают лишь тем больным, у которых отсутствует антиген В (пациентам с первой и второй группой).

Третья (III) группа отличается от второй тем, что в ней антиген В присутствует, тогда как А – отсутствует, поэтому иммунитет вырабатывает к агглютинины к антигену А. Вот почему её переливают лишь людям с первой и третьей группой.

В составе четвертой из-за наличия в ней обоих антигенов (А и В), антитела к ним отсутствуют, поэтому в таблицах она обозначена как АВ. По этой причине её можно вливать лишь обладателям четвертой группы. Зато обладателям IV группы можно при необходимости вливать любую кровь. Раньше это делали постоянно, но недавно были обнаружены факторы, которые могут вызвать отторжение при несовпадении групп.

Как высчитать группу крови ребенка?

Знания о группе крови необходимы при операциях, переливании крови, могут понадобиться и при планировании беременности: если группа малыша отличается от материнской, и смешивается с ней, организм беременной начинает вырабатывать антитела, если в составе крови матери отсутствует антиген. Это приведет к разрушению эритроцитов малыша, что может негативно отобразиться на его жизни или здоровье.

В ходе исследований было установлено, что при сочетании групп крови матери и отца, группа ребенка часто меняется, и с родительской не совпадает. Также нередко бывает так, что под влиянием определенных факторов не совпадает кровь братьев и сестер. Понять, почему в этом случае меняется группа крови у детей, можно изучив соотношения, указанные в следующей таблице:

Мать + Отец	Возможная группа крови у детей (%)
	I	II	III	IV
I+I	100
I+II	50	50
I+III	50	50
I+IV	50	50
II+II	25	75
II+III	25	25	25	25
II+IV	50	25	25
III+III	25	75
III+IV	25	50	25
IV+IV	25	25	50

Исходя из таблицы, очевидно, что точно предугадать, какую группу будет иметь малыш можно лишь тогда, если у родителей первая группа крови, то есть отсутствуют оба антигена. Во всех остальных случаях возможна любая комбинация, причем вполне вероятна ситуация, когда кровь родителей и детей будет не совпадать.

Поэтому во время беременности очень важно периодически сдавать анализы. При несовпадении групп крови матери и ребенка проблемы возникают не так часто, как в том случае, если у них не совпадает резус-фактор.

Что такое резус?

Второй по важности после системы АВ0 является разделение крови на отсутствие или наличие резус-фактора. Так называют белок-антиген, расположенный на мембранах эритроцитов, причем у одних людей он присутствует, у других – отсутствует.

Хотя система резуса состоит из пятидесяти известных антигенов, когда говорят про положительный или отрицательный резус-фактор, обычно имеют в виду антиген D. Согласно статистике, он присутствует у 85% людей.

На здоровье он не влияет, но возникает проблема, если человеку с отрицательной группой перелить с положительным фактором. Несовпадение резуса может негативно повлиять на малыша в утробе, если у беременной отрицательный резус, у ребенка есть положительный. Такое бывает, если резусы родителей отличаются.

Поскольку организм матери и малыша тесно связан друг с другом, нередки случаи, когда по каким-то причинам происходит смешение крови ребенка с материнской. В этом случае иммунитет быстро обнаруживает в крови чужой антиген и начинает синтезировать антитела, направленные на их уничтожение, а также источник, что их вырабатывает, то есть ребенка. Причем меньше всего этот процесс затрагивает первого малыша: при первой беременности он активизируется ближе к родам. А вот на второго ребенка среагирует быстрее уже в первом триместре.

Основную свою активность иммунитет направляет на эритроциты малыша и начинает их разрушать. Это может привести к кислородному голоданию ребенка, результатом чего может стать его смерть в утробе матери, рождение мертвого ребенка или преждевременные роды.

Если малыш окажется жив, у него будет гемолитическая болезнь, которая будет выражаться в желтушной, анемической или отечной форме. Последняя самая опасна, поскольку сопровождается сильным увеличением печени, селезенки, сердца, пониженным количеством белка, что может привести к нарушению функционирования всех систем организма и смерти малыша.

В наше время эта проблема решаема, но беременная должна находиться под медицинским наблюдением весь срок. Если организм ещё не начал вырабатывать антител, матери делают инъекцию резус-иммуноглобулина два раза на протяжении беременности. При наличии антител колоть лекарство нельзя, поэтому врач назначает другой метод лечения. Если женщина все сделает правильно и будет прислушиваться к словам врача, проблемы удастся избежать.

Точно знать, какой резус будет у детей можно лишь в случае, если у матери и отца отрицательный резус: если он отличается, у ребенка может быть любой вариант. Также нельзя точно предсказать резус малыша, если у родителей он положителен: семьдесят пять процентов за то, что антиген будет и у ребенка. Но если у кого-то из предков антиген отсутствовал, нельзя исключать вероятность того, что малышу достанется отрицательный резус.

Другие системы

Помимо резус-фактора и системы АВ0, ученые обнаружили и изучили другие антигены на оболочках эритроцитов, классифицировали и описали их. Стоит заметить, что количество антигенов настолько велико, что постоянно открываются новые факторы, поэтому нельзя точно сказать, сколько групп крови существует на данный момент.

Например, следующей по значимости после резуса идет групповая система под названием Келл. В её состав входит три антигена: К1 (Келл), К2 (Келлано) и К1К2. Чаще всего встречается фактор Келлано (около 90% случаев). Считается, что проблемы из-за несовпадения групп при переливании бывают редко, но описаны случаи, когда возникли осложнения при переливании крови, во время беременности.

Одной из наиболее сложных систем является MNSs, которая состоит из девяти групп крови и при несовпадении также может спровоцировать ответ иммунитета при переливании и беременности. Одной из редчайших групп является Вел-отрицательная группа, которая встречается у одного человека из двух с половиной тысяч. На её формирование влияет белок SMIM1, открытие которого довело число изученных групп до тридцати трех.

Таблица совместимости

При переливании успех операции во многом зависит от того, насколько совпадет состав крови пациента и донора. Поэтому врачи тщательно подходят к изучению сданного донором материала и подбирают наиболее подходящую кровь, ориентируясь не только на систему АВ0, но и другие разновидности. По этой причине в центрах переливания предпочитают заготавливать не цельную кровь, а её компоненты.

При отсутствии нужной группы допускается переливание первой группы с отрицательным резусом больному с любым составом крови, но не больше 500 мл (кроме детей). Если биоматериал необходимо перелить больному с четвертой группой, допускается вливание резус-отрицательной крови или её компонентов от доноров второй и третьей группы, вне зависимости от того, какой резус у больного.

При необходимости переливания крови врачи прежде всего учитывают таблицу совместимости, разработанную по системе АВ0:

Кровь больного	Кровь донора
	I –	I +	II −	II +	II −	III +	IV −	IV +
I –	+
I +	+	+
II –	+	+
II +	+	+	+	+
III −	+	+
III +	+	+	+	+
IV –	+	+	+	+
IV +	+	+	+	+	+	+	+	+

Поскольку несовместимость бывает обусловлена и другими антигенами, что входят в состав эритроцитов, врачи советуют людям заранее заготавливать собственную кровь: от неожиданно полученных травм никто не застрахован. Также это обычно делают перед хирургическими операциями, когда существует возможность кровопотери. Свою кровь иммунитет воспринимает положительно, антител к ней не вырабатывает, поэтому риск отторжения нулевой.

Системы классификации групп крови

Наиболее иммуногенным из 5 основных антигенов группы крови системы резус (табл. 18.3) является антиген D. Распространенность антигена D у населения Российской Федерации — 86% (доля резус-отрицательных лиц, соответственно, около 14%). Иммуногенность других (минорных) антигенов системы резус существенно ниже и убывает в следующем ряду: с > Е > С > е.

Иммунная система резус-отрицательных лиц при контакте с антигеном D синтезирует анти-D-антитела, что клинически важно при аллогенных гемотрансфузиях и беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом (посттрансфузионные гемолитические реакции и гемолитическая болезнь новорожденных, соответственно). В зависимости от гаплотипа на мембране эритроцитов обычно экспрессировано 10000-30000 молекул D, а в некоторых случаях и более.

Существует две особые категории D-позитивных лиц, способных образовывать анти-D-антитела.

• Первая — лица, эритроциты которых характеризуются значительно сниженной экспрессией нормального D на мембране, порядка 100-500 молекул на клетку, «слабый» D (D weak ). Референтным методом выявления слабого D является непрямой антиглобулиновый тест.
• Вторая — лица, эритроциты которых характеризуются экспрессией измененного D (частичный D, D partial ). Предполагается, что белковая молекула D имеет четыре частично перекрывающихся эпитопа: W, X, Y и Z. В редких случаях имеет место недостаток одного или нескольких эпитопов, соответственно, иммунная система лиц с частичным D способна вырабатывать антитела к отсутствующим эпитопам.

По современной классификации, лица с частичным D, способные вырабатывать анти-D-антитела, подразделяются на семь категорий. Наибольшую частоту встречаемости и практическое значение имеет категория VI, эритроциты которой несут только эпитоп Z. Лица категории VI могут вырабатывать антитела к неизмененному D и частичному D всех остальных категорий. Современный подход к выявлению частичного D категории VI предполагает исследование резус-принадлежности с использованием двух реагентов: моноклональных анти-D-антител класса IgМ и поликлональных анти-D-антител класса IgG (либо моноклональных анти-D-антител класса IgG).

Для удобства в повседневной работе иммуногематологических лабораторий слабые варианты антигена D объединяют в группу D u , частота которой составляет около 1%. Эти эритроциты слабо или вообще не агглютинируются полными анти-резус антителами в реакции прямой агглютинации.

Регламентированным является способ определения резус-принадлежности с использованием стандартного универсального реагента антирезус Rh0(D), первично отрицательные образцы дополнительно исследуются с использованием стандартного универсального реагента анти-Rh0″ (DС) и со стандартной сывороткой Rh0-(DСЕ). Резус-отрицательными считают доноров, кровь которых не содержит ни одного из этих трех антигенов (D, С, Е). Указанный способ эффективно и широко использовался до разработки диагностикумов на основе моноклональных антител.

Более обоснованным представляется двух-этапный способ определения резус-принадлежности крови. На первом этапе используют цоликлон «Анти-D-супер» (моноклональные анти-D-антитела класса IgМ). На втором этапе резус-принадлежность определяют в пробирке, применяя стандартный универсальный реагент для определения резус-фактора Rh0(D), либо в желатиновом тесте с использованием цоликлона «Анти-D» (моноклональные анти-D-антитела класса IgG). Сочетание отрицательного результата на первом этапе и положительного — на втором является признаком частичного D, наиболее вероятно — категории VI.

В большинстве (порядка 90%) случаев для частичного D категории VI характерен генотип СсDее. С помощью высокоспецифичных моноклональных антител устанавливается гетерогенность частичного D категории VI.

Реципиенты, содержащие антиген D u , должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ.

Лица с антигеном D u квалифицируются как резус-положительные доноры, так как переливание их крови может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов, а в случае предшествующей сенсибилизации к антигену D — тяжелые трансфузионные реакции. Поэтому кровь доноров следует обязательно тестировать на присутствие D u .

Беременным женщинам с частичным D категории VI, когда ожидается рождение ребенка с полным D, целесообразно назначение антирезусного иммуноглобулина.

Резус-принадлежность крови больных устанавливают по наличию или отсутствию антигена D. Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определение резус-принадлежности проводят дважды. Определение минорных антигенов системы резус, как правило, производится при необходимости многократных трансфузий в тех случаях, когда в сыворотке реципиента обнаружены антитела к антигенам системы резус, а также у беременных женщин.

Результат определения резус-принадлежности крови больных регистрируется в специальном журнале и на бланке с указанием даты и за подписью врача, проводившего определение. Этот бланк вклеивается в историю болезни с указанием даты и подписью лечащего врача.

Результат определения резус-принадлежности крови доноров регистрируется в специальном журнале и в донорской карте с указанием даты и за подписью врача, проводившего определение.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

Реакция гемагглютинации на плоскости с помощью анти-D IgМ (полные антитела) моноклонального реагента

Определение производят в нативной крови, стабилизированной с помощью консервантов; в крови без антикоагулянта, в т. ч. взятой из пальца. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов и температуре около +37°С, поэтому желательно использовать подогретую пластинку.

Ход определения:

• на пластинку со смачиваемой поверхностью наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента;
• рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови;
• смешивают кровь с реагентом стеклянной палочкой;
• через 10-15 с покачивают пластинку в течение 20-30 с;
• реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 с, четко выраженная крупнолепестковая агглютинация наступает через 30-60 с. Результат агглютинации следует учитывать через 3 мин, поскольку с эритроцитами, несущими антиген D u , реакция агглютинации происходит медленнее.

Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии в исследуемых эритроцитах антигена D (кровь — резус-положительная). Отсутствие агглютинации свидетельствует о том, что исследуемые эритроциты не содержат антигена D (кровь — резус-отрицательная). В случае слабой агглютинации делают предположение о наличии на эритроцитах слабого антигена D и проводят исследование фенотипа эритроцитов в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямой пробе Кумбса) с использованием IgG (неполных) анти-D-антител.

сразу же после определения записывают результаты реакции.

Определение слабых форм антигена D (D u ) на втором этапе исследования реакцией конглютинации с желатином в пробирочном тесте с помощью анти-D IgG (неполные антитела) моноклонального реагента

Параллельно с исследованием осуществляют постановку трех контрольных проб:

• а) со стандартными резус-положительными эритроцитами;
• б) со стандартными резус-отрицательными эритроцитами;
• в) с исследуемыми эритроцитами и раствором желатина, но без анти-D-антител.

Ход определения:

• в пробирку вносят одну каплю (0,05 мл) свободных эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или эритроцитов, отмытых от консерванта;
• добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% желатина, предварительно прогретого при 45-50°С до разжижения;
• добавляют одну каплю реагента анти-В;
• перемешивают суспензию;
• инкубируют 10-15 мин в водяной бане или 30 мин в термостате при 48°С;
• прибавляют 5-6 мл физиологического раствора;
• осторожно переворачивают пробирку 1 — 2 раза;
• визуально (невооруженным глазом или используя лупу) определяют наличие агглютинатов.

Агглютинация эритроцитов свидетельствует о присутствии в них антигена D. В случае четкой агглютинации в образце крови, резус-отрицательной по результатам исследования с помощью анти-D IgМ моноклональных антител, делают заключение о наличии антигена D u . В случае нечеткой мелкопесочной агглютинации кровь необходимо тестировать в непрямом антиглобулиновом тесте.

Аналогичным образом наряду с моноклональными реагентами можно использовать стандартные аллоиммунные сыворотки с неполными анти-D-антителами.

При наличии неадекватных результатов контрольных проб определение резус-принадлежности следует повторить с использованием других реагентов или образца желатина. При агглютинации исследуемых эритроцитов желатином в отсутствие анти-D-антител можно предположить наличие на эритроцитах адсорбированных антиэритроцитарных антител анти-резус или иной специфичности.

Определение резус-антигенов с помощью универсальных реагентов

Стандартный реагент антирезус Rh0(О) содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Одновременно с исследованием крови доноров производится контрольное исследование стандартных резус-положительных эритроцитов той же группы или группы 0(I) и стандартных резус-отрицательных эритроцитов обязательно одногруппных с исследуемой кровью.

Ход определения:

• на дно пробирки вносят 1 каплю стандартного реагента антнрезус;
• добавляют каплю исследуемой крови (или эритроцитов);
• содержимое пробирки перемешивают встряхиванием;
• медленно поворачивают пробирку, наклоняя ее почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Такое распределение крови по стенкам пробирки делает реакцию более выраженной;
• агглютинация наступает в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной агглютинации, а также ввиду возможности замедленной реакции при наличии антигена D u , контакт эритроцитов с реагентом при перевертывании следует проводить не менее 3 мин;
• для исключении неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают, не взбалтывая, путем 2-3 -кратного перевертывания пробирки;
• оценку производят визуально.

Наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветленной жидкости свидетельствует о резус-положительной принадлежности исследуемой крови.

Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость) — признак резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.

Результат учитывается как истинный после проверки контрольных образцов, то есть при положительном результате со стандартными резус-положительными эритроцитами и отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью по системе АВО.

Непрямой антиглобулиновый тест (непрямая проба Кумбса) с помощью (неполных) анти-D-антител

Параллельно с исследованием образцов тестируемой крови проводят контрольное исследование со стандартными резус-отрицательными эритроцитами.

Ход определения:

• из исследуемой крови готовят 2-5% взвесь отмытых эритроцитов. С этой целью вносят в пробирку 5 капель (около 0,25 мл) исследуемой крови, три раза отмывают в 5-10 мл физиологического раствора; ресуспендируют осадок эритроцитов в 2-3 мл физиологического раствора или, что предпочтительнее, в 2-3 мл раствора низкой ионной силы — РНИС (в этом случае произойдет более прочная и быстрая фиксация антител на эритроцитах);
• маркируют чистую пробирку;
• вносят в нее 1 каплю реагента анти-D;
• добавляют 1 каплю 2-5% взвеси исследуемых эритроцитов;
• если эритроциты суспендированы в физиологическом растворе — инкубируют смесь при 37°С в течение 30-45 мин; если используют эритроциты в РНИС — 10-15 мин;
• отмывают эритроциты, используя 5-10 мл физиологического раствора: при использовании моноклональных анти-D-антител — однократное отмывание, а при использовании поликлональных анти-D-антител — трехкратное. Следует иметь в виду, что сыворотка крови в разведении 1:4000 инактивирует равный объем антиглобулинового реагента, следовательно недостаточное отмывание может привести к инактивации антиглобулинового реагента и ложноотрицательному результату теста;
• удаляют физиологический раствор;
• добавляют 1 каплю антиглобулинового реагента к осадку эритроцитов и тщательно перемешивают;
• центрифугируют 15-20 с при 2000-3000 об./мин (900-1000 g);
• аккуратно ресуспендируют осадок эритроцитов и визуально определяют наличие или отсутствие агглютинации. При наличии агглютинации кровь является резус-положительной. При отсутствии агглютинации — резус-отрицательной. Слабая агглютинация возможна при экспрессии антигена D u ;
• записывают результаты исследования.

Агглютинация эритроцитов, обработанных протеолитическими ферментами, IgG (неполными) анти-D-антителами

Для усиления прямой агглютинации эритроцитов в солевой среде используют предварительную обработку эритроцитов протеазами (протеолитическими ферментами): бромелином, папайном, трипсином и др. При этом повышается чувствительность метода, в том числе и в отношении слабых форм антигена D. Метод используется в системах автоматизированного определения групп крови. Особенностью этого теста, затрудняющей его применение для рутинного фенотипирования эритроцитов, является феномен прозоны — ингибирование агглютинации избыточным количеством антител. Для избежания феномена прозоны необходимо обеспечить стандартность обработки эритроцитов ферментами и строго соблюдать концентрацию анти-D-антител,- рекомендованную производителем.

Источник: Медицинская лабораторная диагностика, программы и алгоритмы. Под ред. проф. Карпищенко А.И., СПб, Интермедика, 2001